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本试剂盒适用于检测动物血清（浆）、组织和植物等样本中维生素E的含量。


维生素E在菲罗啉的存在下，可使三价铁离子还原成二价铁离子，后者在特定的环境下可与菲罗啉形成粉红色复合物，通过比色，在标准曲线上可查出维生素E的含量，或者通过公式可计算出维生素E的含量。

维生素E是天然脂溶性抗氧化剂，它存在细胞膜性结构中（细胞膜、线粒体、微粒体）以及脂肪细胞的脂滴和循环的脂蛋白中。维生素E不但是单线态氧和超氧阴离子自由基的清除剂，更重要的是脂质过氧化作用的阻断剂。从细胞水平的许多实验说明维生素E和So GSHPX协同地保护细胞免受脂质过氧化损伤。维生素E尚能直接与蛋白硫自由基（pros）偶联，使蛋白巯基恢复活性，维生素E也可通过清除LOO间接地防止蛋白巯基丧失。而蛋白巯基是维护细胞生存的重要环节，因而VE是机体抗氧化的第一道防线。当维生素E缺乏时，机体易受到自由基的攻击而表现出各种病理状态。

批间CV	批内CV	回收率	最底检出线	检测范围
6.38	3.3	97	0.2μg/mL	0.2～114.9μg/mL

• 快速简便：全程约30分钟，可测50例左右样本。
  
• 稳定性好：试剂盒2～8℃存放3个月有效。
  
• 再现性好：变异系数CV=1.7%。
  
• 回收试验：X =103.3%。
  
• 受外界影响因素小：干扰因素少，重复性强。

组分	规格
试剂一：粉剂	1支
试剂二：粉剂	1支
试剂三：液体	5mL
试剂四：匀浆介质	100mL
试剂五：标准贮备液(1mg/mL)	0.6mL

保存：2～8℃，避光，有效期3个月。


试剂一应用液的配制：将一支粉剂溶于6.5mL无水乙醇中，避光保存，此粉剂较难溶解，需要提前3～4小时配制，使用前一定要确定粉剂完全溶解。
试剂二贮备液配制：将一支粉剂溶于25mL无水乙醇配成贮备液避光保存。
试剂二应用液配制：取试剂二贮备液用无水乙醇10倍稀释，应用液2～8℃保存不可超过2天。
12μg/mL维生素E标准应用液配制：取1mg/mL的VE标准品贮备液0.12mL加无水乙醇定容至10mL，即为12μg/mL的VE。

• 分光光度计/酶标仪/半自动生化分析仪（比色测定波长为533nm）
  
• 台式离心机
  
• 漩涡混匀器
  
• 微量移液器

• 试管要用肥皂粉或洗涤净煮开刷洗，再用自来水冲洗干净后双蒸水冲洗一遍。
  
• 试剂二应用液最好当天配制，需多少配多少。
  
• 显色反应5分钟，要准确。
  
• 维生素E的抽提时间（1分钟）要充分。
  
• 因本法为微量测定，故每换一次移液尖，首次吸液要丢弃，以后每次加样或加试剂均要垂直滴入，切勿加在管壁上。
  
• 吸取正庚烷抽提液时，一定要小心吸取，不可将第二层（即水与无水乙醇液相层）混入，否则会影响吸光值。
  
• 显色所用试管要干燥。
  
• 本试剂盒仅用于科研、实验室。

• 血清（浆）可直接测定。
  
• 动物组织样本：用试剂盒中的R4作为匀浆介质按重量体积比制备成组织匀浆液，离心取上清测定。
  
• 植物组织：用试剂盒中的R4作为匀浆介质破碎后离心取上清测定。

• 维生素E的抽提：按步骤加入样本和试剂，抽提1分钟，混匀，3500~4000转/分，离心10分钟，取上清0.8mL待测。
  
• 显色反应：按操作表加入相应的试剂，混匀，室温静置2分钟，待测。
  
• 533nm波长，1cm光径，无水乙醇调零比色。

• 血清（浆）中维生素E的测定：
  
  • 血清（浆）正庚烷维生素E的抽提：
    

    成分	空白管	标准管	测定管
    血清（浆）			0.1mL
    双蒸水	0.4mL	0.3mL	0.3mL
    12μg/mL VE标准品		0.1mL
    无水乙醇	0.6mL	0.6mL	0.6mL
    漩涡混匀20秒（蛋白沉淀）
    正庚烷	1.2mL	1.2mL	1.2mL
    旋涡混匀（充分抽提）1分钟，然后3000～4000转/分，离心5～10分钟。

    注：观察试管内液分为三层，最上层为正庚烷维生素E抽提液，第二层为水及无水乙醇，最下层为蛋白沉淀物。
    
  • 显色反应：
    

    成分	空白管	标准管	测定管
    VE正庚烷抽提液	800μL
    试剂一	100μL
    试剂二	50μL
    混匀，立即记录时间，准确静置5分钟
    试剂三	50μL
    混匀（10秒左右）
    无水乙醇	1mL
    混匀，静置2分钟后，533nm处，1cm光径比色皿，无水乙醇调零，测各管吸光度值。

  • 计算公式：
    

    VE含量 (μg/mL)	＝	OD测定－OD空白	×	标准品浓度 (12μg/mL)	×	样本测试前 稀释倍数
    		OD标准－OD空白

• 组织中维生素E的测定：
  
  • 样本前处理：
    10%组织匀浆的制备：准确称取组织重量，按重量(g)∶体积(mL)=1∶9的比例加入试剂四组织匀浆介质，冰水浴条件下匀浆，2500转/分离心10分，取上清待测。
    
  • 组织匀浆中正庚烷维生素E的抽提：
    

    成分	空白管	标准管	测定管
    10%匀浆上清液			0.4mL
    双蒸水(mL)	0.7	0.6	0.3
    12μg/mL维生素E标准品		0.1mL
    无水乙醇(mL)	0.6	0.6	0.6
    漩涡混匀20秒（蛋白沉淀）
    正庚烷(mL)	1.2	1.2	1.2
    旋涡混匀(充分抽提)1分钟，然后3000～4000转/分，离心5～10分钟。

    注：观察试管内液分为三层，最上层为正庚烷维生素E抽提液，第二层为水及无水乙醇，最下层为蛋白沉淀物。
    
  • 显色反应：
    

    成分	空白管	标准管	测定管
    维生素E正庚烷抽提液	0.8mL
    试剂一	100μL
    试剂二	50μL
    混匀，立即记录时间，准确静置5分钟。
    试剂三	50μL
    混匀（10秒左右）。
    无水乙醇	1mL
    混匀，静置2分钟后，533nm处，1cm光径比色皿，无水乙醇调零，测各管吸光度值。

  • 计算公式：
    

    VE含量 (μg/g组织湿重)	＝	OD测定－OD空白	×	标准品浓度 (12μg/mL)	÷4÷	匀浆液浓度 (g/mL)
    		OD标准－OD空白

    样本取样量为0.4mL，标准品取样量0.1mL，相当于4倍稀释后取样0.4mL。
    
    

    匀浆液浓度 (g/mL)	＝	组织湿重(g)
    		匀浆介质总体积(mL)

    如10%的匀浆液浓度为：0.1g/0.9mL。

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